%0 Journal Article
%T 人凝血ix因子基因乳腺组织特异性表达载体的构建及其在奶山羊乳腺中的分泌性表达
%A 张克忠
%A 卢大儒
%A 邱信芳
%A 黄英
%A 黄淑帧
%J 生物工程学报
%D 1997
%X 血友病b(hernophiliab)是由于人凝血ix因子(hfix)缺乏所致的一种严重出血性疾病。常规治疗方法是通过输血或输入人浓缩凝血ix园子来实现的，因此患者很容易被肝炎病毒甚至爱滋病毒感染。近年来，人们期望通过转基因动物乳腺表达并从乳汁中分离生产hfix蛋白，以解除血友病患者的痛苦。以转基因动物的乳腺组织即乳腺生物反应器生产外源蛋白具有原核生物，酵母以及离俸真核细胞生产系统所不具备的优点：生产的外源蛋白经过体内加工和修饰，特别是真核蛋白的转译后加工(如糖基化和羧基化)．其生化特性、生物学活性与天然蛋白完全相同[1]；另外从乳汁中生产外源蛋白不需要复杂的工厂设备。因此开展人凝血ix因子乳腺生物反应器的研究具有重要的经济意义和临床应用价值。转基因动物乳腺生物反应器的关键在于外源基因乳腺组织特异性表达载体的构建。我们利用小鼠mar元件(matrixattachmentregions)．牛的β-casein基因调控顺序，hfixmini-gene和hfixcdna分别建成两种乳腺组织特异性表达载体pmcixm和pmcix，经sa脂质体包埋载体dna后直接转染奶山羊乳腺小叶，hfix蛋白在奶山革乳汁中获得瞬间分泌性表达，最高表达量为13.7ng/ml乳汁。其中含hfixmini-gene的表达载体在奶山羊乳汁中的表达量高于含hfixcdna的表达载体．表明hfix的in-tronl能够提高该基因在活体奶山羊乳腺中的表达。a7单抗和柠檬酸钡吸附检测表明乳汁中的hfix蛋白羧基化和活性比率都在90％以上。以上结果肯定了载体构建的正确性．不但为研制hfix蛋白乳腺生物反应器提供了有效的表达载体，同时也表明利用阳离子sa脂质体包埋质粒dna直接转染活体物乳腺可以作为验证乳腺表达载体构建正确性的快速检测手段。
%U http://journals.im.ac.cn/cjbcn/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=97040419&flag=1