%0 Journal Article
%T 分枝杆菌mycobacteriumsp.nwib-013-甾酮-9α-羟基化酶基因的克隆、异源表达及分离纯化
%A 范书玥？
%A 魏巍？
%A 王风清？
%A 魏东芝？
%J 生物工程学报
%P 2014-2021
%D 2009
%X 3-甾酮-9α-羟基化酶(ksh)是微生物甾体降解途径中的关键酶,红平红球菌在甾体药物制备中有重要价值。以本实验室从土壤中自行筛选的分枝杆菌mycobacteriumsp.nwib-01为出发菌株,利用rhodococcuserythropolissq1已报道的ksh序列与已全基因组测序的分枝杆菌序列数据库进行比对分析,根据同源基因设计简并引物获得部分ksh序列,通过染色体步移扩增出全长ksh(命名为m.s.-ksh),该基因与耻垢分枝杆菌m.smegmatismc2155的ksh同源性为85%。构建pet32-ksh表达载体,转化大肠杆菌bl21(de3),获得高表达重组转化子菌株,经iptg低温诱导,sds-page电泳分析,目的蛋白主要为可溶性表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上,用ni2+亲和层析柱纯化,纯度达90%以上。本研究为利用基因工程菌进行工业化生产甾体药物奠定了基础。
%K 分枝杆菌nwib-01
%K 3-甾酮-9α-羟基化酶
%K 甾体降解
%K 异源表达
%K 分离纯化
%U http://journals.im.ac.cn/cjbcn/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=gc09002014&flag=1