%0 Journal Article
%T 一株重组大肠杆菌/pet-28a-lpgad的构建及其高效生产γ-氨基丁酸转化条件的优化
%A 田灵芝？
%A 徐美娟？
%A 饶志明？
%J 生物工程学报
%P 65-75
%D 2012
%X 为实现微生物法高效率生产γ-氨基丁酸(gaba)，从一株经多次诱变筛选的具有较高谷氨酸脱羧酶活力植物乳杆菌gb01-21全基因组dna中pcr扩增获得gad酶基因lpgad，构建重组质粒pet-28a-lpgad，在大肠杆菌e.colibl21(de3)中高效诱导表达。并采用ni柱亲和层析纯化获得重组gad，并对其酶学性质进行初步研究，为改良转化工艺提高gaba产量提供可靠理论依据。结果显示，重组大肠杆菌中gad酶活显著提高，可达8.53u/mg，是植物乳杆菌gb01-21中gad酶活的4.24倍。将该重组菌应用于转化l-谷氨酸生产gaba，5l发酵罐水平转化24h产量可达143.5g/l，摩尔转化率为97.32％，是植物乳杆菌gb01-21的2.19倍。纯化后酶学性质进行初步研究表明：其最适ph为4.8；最适温度为37℃；ca2+、mg2+对其有较强的激活作用，将上述实验结果用于转化条件的优化，最终5l发酵罐上进行转化实验，批次添加底物l-谷氨酸共600g，转化24h，gaba累计浓度可达204.5g/l，摩尔转化率为97.92％，与最初转化条件相比，gaba浓度提高了42.5％，为其工业化应用打下了良好的基础。
%K γ-氨基丁酸
%K 谷氨酸脱羧酶
%K 重组大肠杆菌
%K 全细胞转化
%K 优化
%U http://journals.im.ac.cn/cjbcn/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=gc12000066&flag=1