%0 Journal Article %T 表达大肠杆菌谷氨酸-1-半醛氨基转移酶对红色荧光报告蛋白尿卟啉原ⅲ甲基化酶的影响 %A 叶爱华? %A 张宽亮? %A 陈宗梅? %A 荣亮? %A 汪苗? %A 范军? %J 生物工程学报 %P 1717-1723 %D 2010 %X 谷氨酸-1-半醛氨基转移酶(glutamate-1-semiadhydeaminotransferase,gsat)是尿卟啉原ⅲ生物合成上游途径的一个酶,尿卟啉原ⅲ是红色荧光报告蛋白尿卟啉原ⅲ甲基化酶(uroporphyrinogenⅲmethyltransferase,upmt)的底物。为了探明大肠杆菌共表达gsat对upmt荧光强度的影响,通过pcr扩增玉米upmt基因,将其插入petduet-1质粒中第2个顺反子中,构建的载体命名为petu,表达upmt的n端含有组氨酸标签;通过pcr扩增大肠杆菌编码gsat的heml基因,定点突变去除heml基因中ncoⅰ序列,亚克隆至pet-51b质粒,再将获得的heml基因插入petu质粒的第一个顺反子中,构建petegu载体。表达gsat的n端含有strep标签。和单独表达upmt基因相比,表达2个基因后,蛋白印迹分析表明没有明显改变upmt表达量,光谱扫描分析显示没有改变荧光物质的组成,但是增强了重组细胞的红色荧光物质三甲基咕啉的含量,该物质在354nm有特异吸收。用2mmol/l的gsat抑制剂3-氨基-2,3二羟基苯甲酸处理后,表达两种酶的菌落荧光消失,表明重组gsat可能增加内源尿卟啉原ⅲ水平,从而增强重组upmt催化产生的红色荧光。 %K 尿卟啉原ⅲ甲基化酶 %K 红色荧光报告蛋白 %K 谷氨酸-1-半醛氨基转移酶 %K 共同表达 %K 大肠杆菌 %U http://journals.im.ac.cn/cjbcn/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=gc10001717&flag=1