%0 Journal Article %T tmd2前断裂cftr翻译后的连接及氯离子通道功能 %A 朱甫祥? %A 宫贤弟? %A 刘泽隆? %A 杨树德? %A 屈慧鸽? %A 迟晓艳? %J 生物工程学报 %P 1710-1716 %D 2010 %X cftr基因突变导致一种常染色体隐性遗传疾病——囊性纤维化(cf)。利用splitsspdnabintein的蛋白质反式剪接技术的真核细胞双载体转cftr基因,旨在研究翻译后水平cftr的连接,以及由其建立的氯离子通道功能。于cftr膜内第2个跨膜结构域(tmd2)前的glu838密码子后将其cdna断裂为n端和c端两部分,与具有蛋白质反式剪接作用的splitsspdnabintein编码序列融合,分别插入到载体pegfp-n1和peyfp-n1,构建一对真核表达载体pegfp-nint和peyfp-intc。用脂质体将这对载体共转染至幼年仓鼠肾细胞(bhk),瞬时表达实验用westernblotting观察cftr蛋白质的连接,并用膜片钳技术记录cl?通道电流。结果显示,基因共转染细胞呈现完整的cftr蛋白条带,膜片钳记录到全细胞cl?电流和单个cl?通道开放活性。结果表明splitsspdnabintein的蛋白质反式剪接技术可用于双载体共转移cftr基因,为cf基因治疗应用双腺相关病毒载体(aav)转运cftr基因,克服aav的容量限制提供了依据。 %K cftr %K cl?通道 %K split %K ssp %K dnab %K intein %K 蛋白质反式剪接 %K 双载体基因转移 %U http://journals.im.ac.cn/cjbcn/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=gc10001710&flag=1