%0 Journal Article
%T tmd2前断裂cftr翻译后的连接及氯离子通道功能
%A 朱甫祥？
%A 宫贤弟？
%A 刘泽隆？
%A 杨树德？
%A 屈慧鸽？
%A 迟晓艳？
%J 生物工程学报
%P 1710-1716
%D 2010
%X cftr基因突变导致一种常染色体隐性遗传疾病——囊性纤维化(cf)。利用splitsspdnabintein的蛋白质反式剪接技术的真核细胞双载体转cftr基因，旨在研究翻译后水平cftr的连接，以及由其建立的氯离子通道功能。于cftr膜内第2个跨膜结构域(tmd2)前的glu838密码子后将其cdna断裂为n端和c端两部分，与具有蛋白质反式剪接作用的splitsspdnabintein编码序列融合，分别插入到载体pegfp-n1和peyfp-n1，构建一对真核表达载体pegfp-nint和peyfp-intc。用脂质体将这对载体共转染至幼年仓鼠肾细胞(bhk)，瞬时表达实验用westernblotting观察cftr蛋白质的连接，并用膜片钳技术记录cl?通道电流。结果显示，基因共转染细胞呈现完整的cftr蛋白条带，膜片钳记录到全细胞cl?电流和单个cl?通道开放活性。结果表明splitsspdnabintein的蛋白质反式剪接技术可用于双载体共转移cftr基因，为cf基因治疗应用双腺相关病毒载体(aav)转运cftr基因，克服aav的容量限制提供了依据。
%K cftr
%K cl?通道
%K split
%K ssp
%K dnab
%K intein
%K 蛋白质反式剪接
%K 双载体基因转移
%U http://journals.im.ac.cn/cjbcn/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=gc10001710&flag=1