%0 Journal Article
%T 大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pbcg-2100的构建及应用
%A 程继忠 郑波 海涛** 皇甫永穆
%J 生物工程学报
%D 1999
%X 利用分子生物学方法，构建了大肠杆菌分枝杆菌(e.colimycobacterium)穿梭表达质粒pbcg-2100，研究了编码日本血吸虫中国大陆株谷胱甘肽s转移酶(glutathionestransferase,gst)抗原基因在卡介苗(bacilluscalmetteguerin,bcg)中的表达。以含人结核杆菌热休克蛋白(heatshockprotein,hsp)70基因全长序列的质粒pmt-70为模板，扩增出hsp70启动子，测序选出无错配的启动子，将其定向克隆入e.colimycobacterium穿梭质粒pbcg-2000中，构建成e.colimycobacterium穿梭表达质粒pbcg-2100。再将编码gst的cdna按正确的阅读框顺序，克隆到pbcg-2100中hsp70启动子的下游，得到分枝杆菌表达质粒pbcg-gst。将pbcg-gst电转化入bcg中，筛选出重组bcg疫苗，经热诱导后所表达的重组gst(rgst)抗原，为可溶性蛋白，经纯化后，在sds-page上分子量为26kd处可见明显的表达蛋白带，其表达量占bcg菌体总蛋白的13%。westernblot提示rgst能与抗gst的抗体反应。
%K cg穿梭表达质粒
%K gst
%K 基因表达
%K 纯化
%K western
%K blot
%U http://journals.im.ac.cn/cjbcn/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=99020225&flag=1