%0 Journal Article
%T 一种利用分泌型荧光素酶基因表达变化监测活细胞中mirna活性的新方法
%A 田文洪？
%A 董小岩？
%A 王刚？
%A 吴小兵？
%J 生物工程学报
%P 809-816
%D 2010
%X 建立了一种以分泌型的荧光素酶gluc为报告基因的mirna传感器质粒(命名为gsensor)监测活细胞中mirna(microrna)活性的方法。首先构建了paav2neo-gluc-mcs-polya质粒作为gsensor的空载体，同时其中的mcs位点可供插入mirna的靶序列。以mir142-3p为检测对象，将1个和3个拷贝的与mir142-3p完全互补靶序列分别插入paav2neo-gluc-mcs-polya中，构建成mir142-3pgsensor和mir142-3pgsensor-3。将它们分别转染至u937细胞中,检测培养上清中gluc的表达水平。结果显示二者均可有效反映u937细胞中mir142-3p的抑制活性(分别与gsensor空载体相比)，提示gsensor中采用一个拷贝的mirna靶序列即可满足检测要求。并且mir142-3pgsensor也能有效地反映出anti-mir142对mir142-3p活性的抑制作用。随后，分析了时间、转染剂量对gsensor检测结果的影响。结果表明，在u937细胞中mir142-3pgsensor表现的mir142-3p活性在48h后趋于稳定；gsensor转染剂量在0.001~0.05pg/cell范围内不影响其功能。最后，利用mir142-3pgsensor检测了hek293、u937、k562、sp2/0和p815细胞内mir142-3p活性，结果发现mir142-3p活性在u937、k562、sp2/0和p815细胞中均较高，而在hek293中几乎没有活性。用qrt-pcr方法检测mir142-3p的相对拷贝数。结果表明，在hek293、u937和k562细胞中，mir142-3p活性与其相对拷贝数呈正相关。本研究表明gsensor可作为一种有效的mirna活性检测工具，为体外实时动态监测mirna活性提供了一种新方法。
%K mirna
%K mirna活性
%K gsensor
%K 监测
%U http://journals.im.ac.cn/cjbcn/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=gc10000809&flag=1