%0 Journal Article
%T 蛋白激酶c抑制剂staurosporine对a类清道夫受体胞浆域结构去除后功能的影响
%A 管晓翔？
%A 陈琪？
%A 范乐明？
%J 生物化学与生物物理进展
%D 2004
%X a类清道夫受体（scavengerreceptor，sr-a）是一种主要位于巨噬细胞膜表面的同源三聚体糖蛋白，能够结合和摄取多种配基并介导内移.在清道夫受体胞浆域有几个潜在的磷酸化位点，有关这些磷酸化位点与受体功能之间的确切关系目前尚所知甚少.为深入探讨a类清道夫受体胞浆域与磷酸化之间的关系,以及受体胞浆域磷酸化对受体功能的影响，实验以含有sr-acdna质粒为模板,采用pcr方法扩增不含胞浆域序列的清道夫受体，同时扩增全长清道夫受体作为对照.pcr产物经纯化酶切后，进一步亚克隆到pcdna3.1/hisb中，测序结果表明,重组产物能够编码正确的氨基酸序列.重组产物经脂质体lipofectamine(lf2000)介导转化入cho细胞中，在含g418选择性培养液中培养筛选14天后，分离阳性克隆,继续培养.采用流式细胞计数仪（facs）鉴定转化筛选后细胞能否表达具有功能的清道夫受体.结果发现,转化的cho细胞可以稳定表达sr-a的蛋白质，但受体胞浆域去除后,摄取配基的能力明显弱于全长组（1∶1.337）.用荧光dii标记乙酰化低密度脂蛋白(dii-acldl),37℃孵育转化细胞5h后,激光共聚焦显微镜下观察到：全长受体转化组细胞荧光散在分布于细胞膜和细胞器，而去除胞浆域组荧光只局限于细胞膜，说明sr-a胞浆域可能起着介导受体内移的作用.进一步比较蛋白激酶c抑制剂星形孢菌素(staurosporine，sta）对两组细胞受体功能的影响，发现经sta处理后，全长组受体与配基的结合及摄取明显增高，而胞浆域去除后受体不受sta的调控.从而证明磷酸化药物可能是通过改变sr-a胞浆域磷酸化水平而发挥作用，受体胞浆域磷酸化可能决定着受体的内移，并参与调节受体的活性.
%K a类清道夫受体
%K 胞浆域
%K 磷酸化
%K 蛋白激酶c抑制剂
%U http://www.pibb.ac.cn/pibbcn/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=20040805&flag=1