%0 Journal Article %T 细胞内物质转运调节分子arfgap3的克隆表达及生化活性 %A 刘晓勤? %A 张成岗? %A 邢桂春? %A 陈清棠? %A 贺福初? %J 生物化学与生物物理进展 %D 2001 %X adp核糖基化因子-gtp酶活化蛋白(arfgap)是重要的细胞内物质转运调节分子.在22周孕龄人胎肝cdna文库中发现一种新基因,其编码的氨基酸序列与大鼠arf1gap有32%同源性.将这种新基因命名为“arfgap3”,对其进行功能研究,利用逆转录-聚合酶链式反应(rt-pcr),从人胎盘总rna中扩增arfgap3全长cdna序列,并将其亚克隆到pgem-t载体;采用rna印迹法和斑点杂交法,检测其组织表达谱,发现在多种腺体和睾丸中有很高水平arfgap3基因转录,并且只有一种约2.7kb的转录本.利用基因重组技术,构建表达质粒pbad/thio-arfgap3,在大肠杆菌中表达,采用亲和层析法纯化表达产物,利用肠激酶切除重组融合蛋白n端引导序列.检测重组arfgap3的生化活性,证实arfgap3对arf1具有gap活性,促进arf1结合的gtp水解为gdp,磷脂酰肌醇二磷酸(pip2)增强其gap活性,而磷脂酰胆碱(pc)抑制其gap活性. %K arfgap3 %K 细胞内物质转运 %K adp核糖基化因子 %K gtp酶活化蛋白 %K 生化活性 %U http://www.pibb.ac.cn/pibbcn/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=20010417&flag=1