%0 Journal Article
%T 靶向端粒酶逆转录酶（htert）rnai载体的构建及活性评价
%A 夏云？
%A 林汝仙？
%A 郑素军？
%A 张敏丽？
%A 王升启？
%J 生物化学与生物物理进展
%D 2004
%X rna干涉是由与特定基因同源互补的双链rna，在体内以序列特异的方式引发靶基因的mrna降解，从而导致转录后基因沉默的过程.为研究内源性的sirna对靶基因的抑制效果，用ppur/u6载体构建用于细胞内转录靶向htert基因的短发夹状sirna表达质粒，并评价其对htert基因的抑制效果.将htertcdna3565～3583一段19bp的dna序列及其反向重复序列，用9bp的连接序列连接后再接上5个t碱基，将此段dna序列克隆至ppur/u6载体u6启动子的下游，形成能在体内合成htert特异性短发夹状rna的重组质粒载体ppur/u6/htert.将ppur/u6/htert与对照质粒ppur/u6分别转染hepg2细胞.采用嘌呤霉素筛选和富集转染具有抗性的细胞.收集存活的细胞接种12孔板、提取rna和蛋白质.以细胞计数法测定细胞的生长速度,rt-pcr和蛋白质印迹分析htert基因的表达,端粒重复放大测定法检测端粒酶活性,蛋白质印迹检测p53蛋白水平.与转染对照质粒ppur/u6的细胞相比，转染ppur/u6/htert的细胞其htert基因表达水平显著下降,端粒酶活性降低,细胞生长速度变慢,p53蛋白表达明显升高.以上结果表明,以dna质粒为载体产生的内源性短发夹状sirna能高效抑制htert基因的表达，有望成为基因功能研究的有力工具.
%K rna干扰
%K 端粒酶逆转录酶
%K p53
%U http://www.pibb.ac.cn/pibbcn/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=20041204&flag=1