%0 Journal Article
%T 哈维氏弧菌外膜蛋白ompw基因克隆、表达及dna疫苗的免疫效果
%A 黄浦江？
%A 黄郁葱？
%A 简纪常？
%A 吴灶和？
%A 鲁义善？
%A 张雪利？
%J 水产学报
%P 1839-1847
%D 2013
%R DOI:10.3724/SP.J.1231.2014.48808
%X 参照genbank上登录的哈维氏弧菌外膜蛋白ompw基因序列,设计引物扩增ompw的开放阅读框,序列分析结果显示该基因全长645bp。将其定向克隆到原核表达载体pet-32a(),在大肠杆菌bl21中成功表达出带his-tag的融合蛋白,融合蛋白分子量约为43.8ku,且主要以包涵体形式存在。优化的表达条件为37℃,iptg浓度0.1mmol/l,诱导时间5h。将纯化的融合蛋白免疫spf昆明小鼠制备多克隆抗体,elisa方法检测抗体效价达1∶30000,western-blot结果表明鼠抗ompw血清能与诱导后的重组蛋白发生特异反应,提示ompw可能是哈维氏弧菌的一种重要保护性抗原。为进一步研究哈维氏弧菌外膜蛋白ompw基因dna疫苗对红笛鲷的免疫保护效果,构建了真核表达重组质粒pcdna-ompw,然后将真核质粒免疫接种红笛鲷。pcr结果显示,免疫接种后第7～28天,在红笛鲷的肌肉、头肾、肝脏和脾脏组织中均存在质粒分布;rt-pcr结果显示,免疫接种后第7～28天,红笛鲷上述组织均有目的基因的表达。elisa结果表明,红笛鲷体内血清产生了抗ompw蛋白的高效价抗体。western-blot分析表明,dna疫苗免疫后红笛鲷体内表达了相应的目的蛋白,并诱导产生了相应抗体。攻毒实验结果表明,免疫保护率高达60%,可见pcdnaompw可作为红笛鲷预防哈维氏弧菌感染的有效候选疫苗之一。
%K 哈维氏弧菌
%K 外膜蛋白
%K ompw
%K 免疫原性
%K dna疫苗
%U http://www.scxuebao.cn/scxuebao/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=20130708808&flag=1