%0 Journal Article
%T 构建人cu,zn-sod毕赤酵母转化子及其高表达研究
%A 迟春萍
%A 时成波
%A 曹玉锋
%A 陈子杨
%A 徐军
%A 张健锋
%A 贾媛
%A 李铮
%A 王小杰
%J 食品科学
%D 2012
%X ？设计人cu,zn-sod酵母偏爱密码子并化学合成，与ppic9k连接，构建酵母偏爱密码子的人cu,zn-sod基因真核表达载体，通过电转化和持续加压筛选毕赤酵母gs115高拷贝转化子，获得的重组高表达酵母菌株建立主种子批。经southernblot鉴定，基因拷贝数提高2～8倍，活性检测显示提高2～4倍。重组菌的目的基因拷贝数与表达产物呈正相关；表达产物为二聚体，其分子质量为40kd左右，低糖基化，均为分泌表达。westernblot法分析，对cu,zn-sod抗体具有特异性反应。转化子在培养16h后进入对数生长期，24h后进入生长稳定期；转化子培养20h左右进行诱导表达最为合适。高拷贝的3株重组菌经50次传代后插入的目的基因保持稳定；cu,zn-sod转化子用正交试验筛选摇瓶的诱导表达条件，经诱导表达，cu,zn-sod表达上清最高活性大于600u/ml。确立最适摇瓶培养条件为ph6.0、30℃、体积分数1.5%甲醇诱导72h测得上清的目的蛋白表达最好，表明构建了高表达菌株。
%K 毕赤酵母gs115
%K cu
%K zn-sod
%K 电转化法
%K 高拷贝
%K 真核表达
%U http://www.spkx.net.cn/CN/abstract/abstract27846.shtml