%0 Journal Article
%T 小牛凝乳酶原基因在乳酸克鲁维酵母中的表达及遗传稳定性研究
%A 冯镇
%A 张兰威
%J 食品科学
%D 2008
%X ？目的:构建小牛凝乳酶原乳酸克鲁维酵母分泌型表达载体,表达重组凝乳酶原。方法:通过pcr获得小牛凝乳酶原cdna片段,将目的基因插入酵母表达载体pklac1α结合因子分泌信号下游,得到重组载体pklac1-prochymosin。sacⅱ线性化后氯化锂转化乳酸克鲁维酵母gg799,用含5mmol/l乙酰胺的ycb固体培养基筛选转化酵母菌,pcr鉴定目的基因,利用特异性引物筛选多拷贝转化子。阳性转化子经摇瓶表达,取上清tca沉淀后做tricinesds-page分析并检测凝乳酶的活力,通过检测阳性转化子产凝乳酶的活力考察其遗传稳定性。结果:经测序及pcr证实,凝乳酶原cdna准确插入酵母表达载体pklac1中,转化后重组载体通过同源重组整合进入酵母基因组中。tricinesds-page分析证明凝乳酶的分子量约为36kd,酸处理后测得培养基中凝乳酶的酶活为83su/ml,阳性转化子遗传稳定性好。结论:成功构建出酵母表达载体pklac1-prochymosin,在培养基中获得分泌的重组凝乳酶原,经过酸处理后凝乳酶原转化为有活性的凝乳酶。
%K 乳酸克鲁维酵母
%K 凝乳酶
%K 分泌表达
%U http://www.spkx.net.cn/CN/abstract/abstract13781.shtml