%0 Journal Article
%T 优化宿主菌在重组系统中构建大容量天然噬菌体抗体库
%A 孙巍
%A 林珩
%A 花芳
%A 胡卓伟*
%J 药学学报
%P 66-70
%D 2013
%X 制备大容量天然噬菌体抗体库。从健康成人外周血和新生儿脐带血中提取淋巴细胞总rna,反转录后pcr分别扩增抗体重链和轻链基因。将获得的基因片段通过overlappcr连接为单链抗体基因(scfv),限制性内切酶酶切后连入pdan5a载体中,连接产物转化大肠杆菌xl2-bluemrf’。与xl1-blue菌株相比,初级库库容增加了3.9倍。再将初级库噬菌体感染含有cre重组酶的大肠杆菌bs1365,抗体基因在重组酶作用下发生同源重组,最终得到库容为1.7×1011的噬菌体抗体库。经检测,该抗体库多样性良好,利用该库可获得针对6种抗原的抗体。以上结果表明,应用xl2-bluemrf’作为抗体基因的转化宿主,提高了噬菌体抗体库的库容,获得的抗体库可用于下一步抗体药物的筛选。
%U http://www.yxxb.com.cn:8081/aps/CN/abstract/abstract14869.shtml