%0 Journal Article
%T 双载体断裂cftr基因转移及翻译后的连接和功能
%A 朱甫祥*
%A 刘泽隆
%A 屈慧鸽
%A 迟晓艳
%J 药学学报
%P 60-65
%D 2010
%X 囊性纤维化跨膜电导调节体(cftr)基因突变导致一种常染色体隐性遗传病囊性纤维化(cf),利用腺辅助病毒(aav)载体转运cftr基因的基因疗法受到aav载体容量的限制。本文采用intein的蛋白质反式剪接技术,以双载体转运cftr基因,研究了于其调节结构域(r)断裂成两部分的cftr基因翻译后的连接及其产生的cl？通道功能。将人cftrcdna于r结构域的ser712密码子前断裂,构建一对融合sspdnabintein编码序列的真核表达载体。将这对载体共转染培养的幼年仓鼠肾(bhk)细胞,通过瞬时表达,全细胞和单通道膜片钳记录cl？电流,并用westernblotting观察cftr蛋白的剪接。结果表明,共转染细胞显示较高的全细胞cl？电流和单个cl？通道开放活性,说明cftr的cl？通道功能的恢复,用cftr特异性抗体进行的细胞总蛋白westernblotting显示有完整的cftr蛋白条带形成,表明intein可有效连接翻译后的两部分cftr蛋白。结果提示,蛋白质剪接技术可有效用于双载体系统转运cftr基因,为进一步应用双aav载体转运cftr基因的cf基因治疗研究提供了实验依据。
%U http://www.yxxb.com.cn:8081/aps/CN/abstract/abstract13613.shtml