%0 Journal Article %T 疏绵状嗜热丝孢菌糖化酶基因的克隆及在毕赤酵母中的表达 %A 徐荣燕 %A 张亚波 %A 谢晨 %A 李多川 %J 农业生物技术学报 %P 272-279 %D 2010 %X ?以疏绵状嗜热丝孢菌(thermomyceslanuginosus)cdna为模板,克隆了糖化酶(gla)基因,序列分析表明gla的开放阅读框由1854个核苷酸组成,编码617个氨基酸。根据氨基酸序列推算该酶的分子量为64kda,属于糖苷水解酶第十五家族,具有该家族催化保守区的典型特征。pcr扩增gla的成熟蛋白编码基因,构建表达载体,经线性化后电击转化导入巴斯德毕赤酵母(pichiapastorisgs115),并成功进行了表达。重组酶经摇瓶发酵后酶活可达11.6u/ml,经硫酸铵沉淀、deae-sepharosefastflow阴离子交换等步骤纯化了该重组蛋白,sds-page显示该重组蛋白大小约为67kda,比推测的蛋白分子量稍大,可能与该蛋白的糖基化有关。该重组酶的最适反应温度和最适ph值分别为60℃和5.0,该酶具有较高的热稳定性,70℃保温20min后剩余酶活为54%。 %K 疏绵状嗜热丝孢菌 %K 糖化酶 %K 克隆 %K 毕赤酵母 %K 性质 %U http://www.jabiotech.org.cn/CN/abstract/abstract9033.shtml