%0 Journal Article
%T 猪肌肉生长抑制素(mstn)前肽定点突变载体的构建及其原核表达
%A 姜声旺
%A 张晓玮
%A 王在贵
%A 崔文涛
%A 李奎
%J 农业生物技术学报
%P 347-355
%D 2012
%X ？肌肉生长抑制素(mstn)能够限制肌纤维的增粗增大，而突变的肌肉生长抑制素前肽(pro-mstn-d75a)能阻止mstn与相应受体的结合，从而解除mstn对肌纤维的抑制作用。猪是我国最重要的肉用家畜，通过操作mstn提高其瘦肉产量，将对我国生猪生产具有特殊意义。本研究用通城猪妊娠3个月的胚胎为材料，提取背最长肌rna并以此为模板，用反转录pcr扩增猪mstn前肽cdna序列(不含信号肽)，并将其连接到原核表达载体pgex-6p-1上。通过定点突变将编码天冬氨酸的密码子变为丙氨酸密码子(d75a)，构建了原核表达载体pgex-prom(sp-)和pgex-prom(sp-)d75a。重组质粒转化大肠杆菌(escherichiacoli)bl21感受态细胞并经iptg诱导表达，结果表明，转化pgex-prom(sp-)质粒的e.colibl21工程菌用终浓度为0.6mmol/l的iptg诱导5h表达情况最好；而转化pgex-prom(sp-)d75a的工程菌在1mmol/l的iptg诱导6h的条件下表达情况最好。用gst-trap蛋白纯化系统纯化回收总分子量大小约为51kd融合蛋白(gst蛋白标签分子量为26kd，mstn前肽蛋白分子量为25kd)。纯化蛋白的浓度prom(-sp)为1.87mg/ml，prom(-sp)d75a为1.21mg/ml。本研究建立了大肠杆菌表达猪mstn前肽的最佳条件，提高了生产效率，并为研究mstn前肽在动物体内的生物学功能以及制备单克隆抗体提供基础资料。
%K 猪
%K 肌肉生长抑制素
%K 前肽
%K 突变
%K 原核表达
%U http://www.jabiotech.org.cn/CN/abstract/abstract8727.shtml