%0 Journal Article %T 胱硫醚β-合酶/胱硫醚γ-裂解酶-硫化氢体系小干扰rna对大鼠正常肝细胞系brl凋亡的影响 %A 闫骏 %A 李彦敏 %A 郭雪西 %A 章明放 %J 天津医药 %D 2014 %X ?目的探讨内源性胱硫醚β-合酶(cbs)/胱硫醚γ-裂解酶(cse)-硫化氢(h2s)体系在生理状态肝细胞凋亡中的影响。方法培养大鼠正常肝细胞株brl。小干扰rna(sirna)序列筛选:随机分组为阴性sirna序列转染组、cbssirna序列转染组和csesirna序列转染组,转染时间为48h或24h;sirna转染后细胞凋亡检测:随机分组为sirna阴性对照组、溶剂对照组、cbssirna组、csesirna组、(cbs+cse)sirna组,作用时间为转染后0、4、8、12、24h;凋亡机制探讨:随机分组为sirna阴性对照组、cbssirna组、csesirna组、(cbs+cse)sirna组,作用时间为转染后4、8、12、24h;每组均为4个平行样。rt-pcr、westernblot检测brl细胞中cbs、cse的表达,sirna基因静默cbs、cse,去蛋白法检测h2s生成,hoechst荧光染色、流式细胞术检测brl细胞凋亡,荧光染色检测线粒体膜电位(mmp)变化,westernblot检测胞浆内细胞色素c(cytc)和激活型caspase3蛋白表达变化。结果brl细胞株存在cbs、cse表达。cbs/csesirna转染后,细胞内源性h2s生成降低,细胞凋亡且凋亡率随时间延长而逐渐增加。结论抑制内源性h2s体系可引起生理状态肝细胞凋亡,机制可能部分涉及凋亡线粒体途径。 %K 胱硫醚β-合酶 %K 胱硫醚γ-裂解酶 %K 硫化氢 %K 小干扰rna %K 凋亡 %K brl细胞 %U http://60.30.86.82:10080/Jwk_tjyy/CN/abstract/abstract8995.shtml