%0 Journal Article
%T 利用crispr/cas9n系统构建asxl2基因敲除的nih3t3稳定细胞系
%J 天津医药
%P 1104-1107
%D 2015
%X ？：目的利用crispr/cas9n系统在nih3t3小鼠胚胎成纤维细胞系中敲除asxl2基因。方法设计一对靶向小鼠asxl2基因第5个外显子的小向导rna（sgrna），分别克隆进px462载体。将测序鉴定正确的重组质粒转染至nih3t3细胞中，利用有限稀释法得到单细胞，通过培养获得单克隆细胞系。提取单克隆细胞系基因组dna，ge?notypingpcr扩增出靶位点附近的dna片段并测序。利用westernblot方法检测细胞株中asxl2的敲除效果。结果成功构建靶向asxl2的crispr/cas9n重组质粒。将2个重组质粒共转染nih3t3细胞，嘌呤霉素筛选后得到亚克隆细胞系，并且经genotypingpcr测序验证得到一株正确的单克隆细胞系。westernblot证实敲除asxl2后，该nih3t3细胞系中asxl2蛋白表达缺失。结论通过这个系统得到了靶向asxl2的crispr/cas9n重组质粒及稳定敲除asxl2的？nih3t3细胞系。
%K asxl2
%K crispr/cas9n
%K crispr系统
%K 表观遗传
%U http://60.30.86.82:10080/Jwk_tjyy/CN/abstract/abstract9438.shtml