%0 Journal Article
%T 猪流行性腹泻病毒、猪肠道病毒9型及猪嵴病毒三重rt-pcr检测方法建立及初步应用
%A 任玉鹏
%A 张斌
%A 岳华
%A 刘燕
%J 牲畜兽医学报
%P 603-608
%D 2014
%X ？旨在建立一种同时检测猪流行性腹泻病毒（pedv）、猪肠道病毒9型（pev-9）、猪嵴病毒（pkv）的三重rt-pcr法，并初步应用于临床样品检测。根据genbank中pedv和pkv基因序列保守区设计2对引物，参照文献合成1对pev-9引物，在同一体系进行rt-pcr扩增，对引物浓度、退火温度、灵敏度、特异性等进行优化，应用该法对采自四川省6个猪场46份样品进行检测。结果表明引物量分别为pedv0.5μl、pev-90.25μl、pkv0.25μl，退火温度为55℃时扩增效果最理想；本方法最低检测量分别为pedv5.97pg、pev-90.11pg、pkv0.74pg；用该方法对猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒、猪萨佩罗病毒、猪博卡病毒、猪环曲病毒、猪源大肠杆菌、猪源沙门菌、副猪嗜血杆菌、猪链球菌和空肠弯曲杆菌等病原进行rt-pcr扩增时，均无非特异性扩增条带出现。对46份腹泻样品的检测结果显示，pedv感染率为76.1%、pev-9为73.9%、pkv为39.1%，3种病原在同一样本检出率达29.1%，表明存在混合感染或协同致病的可能；与单项rt-pcr法相比，阳性样本的检出符合率均在91%以上，表明该方法具较高可信度。建立的方法可快速、准确地检测3种猪腹泻病毒性病原，为病原学诊断和分子流行病学调查提供了有效技术支持。
%K 多重rt-pcr
%K pedv
%K pev-9
%K pkv
%K 检测
%U http://118.145.16.233/Jweb_xmsy/CN/abstract/abstract13219.shtml