%0 Journal Article %T 禽白血病j亚群病毒实时荧光定量pcr检测方法的建立及应用 %A 董征英 %A 张伟华 %A 李冰 %A 常维山 %J 牲畜兽医学报 %P 1096-1102 %D 2012 %X ?本研究旨在通过荧光定量pcr方法研究禽白血病j亚群病毒(alvj)在家禽体内各个器官的分布。根据alvjnx0101毒株基因5258—5510bp的碱基序列,设计了1对特异性引物,进行rtpcr反应,扩增产物为253bp,将该产物连接t载体作为realtimepcr反应的标准品,利用sybrgreeni染料进行realtimepcr反应,建立了标准曲线,并进行反应灵敏性,特异性和重复性试验。然后用已建立的方法对人工感染alvj的spf鸡心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胸腺、法氏囊、腺胃进行3次重复检测,将ct值带入标准曲线公式得出各个组织的病毒拷贝数。试验结果表明:标准曲线线性关系r值均为0.9914,检测极限约为81拷贝质粒dna,比rtpcr灵敏100倍以上;特异性分析表明只有alvj能检测到特异性的熔解度峰值;批内和批间重复性试验的变异系数均小于5%。通过比较数值以得出胸腺alvj基因含量是最高的,肺脏、脾脏、法氏囊含量也比较高,心脏拷贝数最低。自然感染发病鸡各器官alvj基因均高于人工感染alvj的基因含量。本研究所建立的alvj基因实时荧光定量rtpcr方法灵敏度高、特异性强、检测周期短,初步探讨了禽白血病j亚群病毒在畜禽体内各个器官的病毒分布。这为以后禽白血病的诊断以及治疗提供了重要的技术支持。 %K 禽白血病病毒j亚群 %K 荧光定量pcr %K 病毒分布 %U http://118.145.16.233/Jweb_xmsy/CN/abstract/abstract11318.shtml