%0 Journal Article %T 猪肝羧酸酯酶1基因的克隆和在原核细胞中的功能性表达 %A 肖启玲 %A 李朋辉 %A 闫秉芳 %A 杨路 %A 王喜亮 %A 肖运才 %A 李自力 %A 刘梅 %A 毕丁仁 %A 石德时 %J 牲畜兽医学报 %P 650-656 %D 2015 %X ?为获得有活性的猪肝羧酸酯酶1(ple1)并研究其功能,利用rt-pcr与常规pcr方法,从大白猪肝组织中扩增ple1基因的orf。将ple1的orf序列连接到pet15b原核表达载体,在origamitm2(de3)中与pgro7质粒共诱导表达,纯化目的蛋白质并检测其酶活性。测序结果表明克隆到ple1基因编码区全长1686bp的片段,该片段编码562个氨基酸。sds-page和westernblotting结果显示,ple1融合蛋白质成功表达,在30℃的培养温度下,iptg诱导6h后,ple1重组蛋白质表达量最高,且大部分以可溶性形式存在。酶活性试验结果表明,ple1融合蛋白质水解底物p-npa的酶活力为1.24u。研究结果不仅为研究ple1水解兽药特性提供高纯度的具有原有酶活性的重组蛋白质,也为ple同工酶家族其他重要成员的活性功能研究提供理论依据和技术手段。 %K 猪肝羧酸酯酶1 %K 功能性表达 %K 活性检测 %U http://118.145.16.233/Jweb_xmsy/CN/abstract/abstract13554.shtml