%0 Journal Article %T 小鼠Islet-1基因RNAi慢病毒载体的构建 %A 智深深 %A 朱静 %A 田杰 %A 刘官信 %A 鲁荣 %A 林建萍 %A 刘建平 %J 解放军医学杂志 %P 170-173 %D 2011 %X [摘要]目的?构建高效沉默小鼠Islet-1基因的慢病毒载体。方法??针对小鼠Islet-1基因设计3个RNAi靶序列,合成相应的?短发卡RNA(shRNA)寡核苷酸序列(oligo):Sh1、Sh2、Sh3,分别插入经酶切后的PLVTHM载体。经PCR和测序方法筛选阳性克隆,?抽提阳性克隆质粒经大肠埃希菌扩增后,与其辅助包装质粒共同感染293T细胞制备慢病毒载体,利用斑形成试验测定病毒滴度。?感染C???3???H???10???T1/2细胞株,以流式细胞仪检测其感染效率、荧光定量PCR检测其干扰效率。结果??与正常C3?H10?T1/2细胞比较,测序?及PCR结果显示目的片段插入正确;病毒滴度值为3.87×10???8???TU/ml;慢病毒载体对C???3???H???10???T1/2细胞感染效率达90.36%;3个靶点?(抑制效率分别为76.8%、55.1%和11.7%)均有干扰效果,与正常细胞比较,Sh1靶点干扰效果最为显著(76.8%,P<0.05)。结论????成功构建高效沉默Islet-1基因慢病毒载体。 %K 慢病毒感染 %K RNA干扰 %K 基因 %K Islet-1 %K 细胞分化 %U http://www.jfjyxzz.org.cn/Magazine/Show.aspx?ID=40111