%0 Journal Article
%T RGD修饰携带tumstatin及eGFP新型腺病毒载体的构建及其表达研究
%A 齐宗利
%A 王东阳
%A 边晔
%A 赵俊丽
%A 孙晓聪
%A 夏海滨
%J 解放军医学杂志
%P 1215-1218
%D 2010
%X ［摘要］目的？构建RGD修饰表达绿色荧光蛋白（eGFP）和肿瘤抑素（tumstatin）的新型腺病毒载体。方法？？PCR扩增tumsta-？tin基因，经克隆后构建pAd5-CMV/tumstatin穿梭载体。重叠PCR方法将RGD序列插入到Ad5纤维蛋白的HI环中，获得pMfiber-？RGD穿梭载体。穿梭载体与腺病毒骨架载体线性化后共转化E.coliBJ5183，构建pAd-RGD-eGFP骨架载体。最后，使用磷酸钙法将？pAd5-CMV/tumstatin穿梭载体和pAd-RGD-eGFP骨架载体共转化HEK293细胞。7～10d后收集细胞裂解物得到Ad-RGD-tumsta-？tin/eGFP病毒。将经过修饰的Ad-RGD-tumstatin/eGFP和未修饰的Ad-WT-tumstatin/eGFP病毒分别感染脑胶质瘤U87MG细胞？（病毒剂量分别为1、10、100Vp/细胞），通过观察其荧光强度评估其感染效率。以上两种病毒分别感染HeLa细胞，并分别采用RT-？PCR及Westernblotting检测tumstatin细胞mRNA及培养上清中蛋白的表达水平。结果？？病毒感染48h后，可观察到修饰后的腺病？毒Ad-RGD-tumstatin/eGFP对U87MG细胞的感染效率明显高于未修饰的腺病毒Ad-WT-tumstatin/eGFP。RT-PCR及Western？？blotting可检测到感染Ad-RGD-tumstatin/eGFP后的HeLa细胞中tumstatin的转录和表达。结论？？成功构建经RGD修饰并表达？tumstatin和eGFP基因的新型腺病毒载体，为进一步研究tumstatin在低表达柯萨奇-腺病毒受体的肿瘤中的作用奠定了良好基础。
%K RGD
%K 腺病毒科
%K 肿瘤抑素
%U http://www.jfjyxzz.org.cn/Magazine/Show.aspx?ID=32099