%0 Journal Article %T 副溶血弧菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立 %A 孙宏迪 %A 杜昕颖 %A 汪舟佳 %A 王玉飞 %A 宋宏彬 %A 孙岩松 %A 黄留玉 %A 杨振洲 %A 陈泽良 %J 解放军医学杂志 %P 969-972 %D 2010 %X 目的?建立一种快速检测副溶血弧菌的实时荧光定量PCR方法。方法??根据副溶血弧菌tdh基因设计合成引物及?TaqMan探针,利用阳性质粒和模拟标本建立副溶血弧菌实时荧光定量PCR检测方法。结果??以副溶血弧菌DNA为模板克隆了?tdh基因,得到阳性质粒。利用阳性质粒建立了定量PCR方法,得到标准曲线y=-4.9197x+58.72,决定系数(R2??)为0.9864。此方?法具有很好的特异性,在对15种肠道致病菌的检测中,只有副溶血弧菌基因组DNA的扩增结果为阳性。对粪便和食物模拟标本进?行检测,敏感性均为10??2??cfu/μl。此方法重复性较好,对4种浓度(10???5??、10???4??、10???3??、10???2??cfu/μl)的菌液各进行3次检测,结果均为阳性,且Ct?值的变异系数<2%。结论??建立了一种检测副溶血弧菌的荧光定量PCR方法,该法的敏感性和特异均较好,适用于快速、准确地检?测食品和粪便中的沙门菌。 %K 弧菌 %K 副溶血性 %K 基因 %K tdh %K 实时定量聚合酶链反应 %K DNA探针 %U http://www.jfjyxzz.org.cn/Magazine/Show.aspx?ID=31881