%0 Journal Article
%T 死亡相关蛋白激酶C末端对谷氨酸诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的抑制作用研究
%A 张海涛
%A 汪亚君
%A 范大华
%A 陈小谊
%A 刘慧明
%J 解放军医学杂志
%P 839-844
%D 2010
%X 目的？观察死亡相关蛋白激酶（DAPK）蛋白C-末端多肽（DCTP）对谷氨酸诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的作用，探讨？DCTP抑制DAPK功能的机制。方法？？采用PCR法扩增DCTP核酸片段，定向连接至质粒pEGFPN1、pIRES2-EGFP和pcDNA3.1？（-），将重组质粒［pEGFPN1-DCTP、pIRES2-DCTP-EGFP和pcDNA3.1（-）-DCTP］转染至SH-SY5Y细胞中，筛选稳定细胞株。分析？pEGFPN1-DCTP的表达产物在细胞中的定位。建立稳定表达DCTP的SH-SY5Y细胞。用MTT法、Hoechst33258染色法和流式细？胞仪检测SH-SY5Y细胞对谷氨酸的敏感性，用Westernblotting检测细胞内DAPK的表达量以及磷酸化DAPK（p-DAPK）水平的变？化。结果？？谷氨酸对SH-SY5Y细胞生长的抑制作用具有浓度依赖性，40mmol/L的谷氨酸对细胞的抑制率为51.7%。流式细胞仪？检测结果显示，40mmol/L谷氨酸处理后细胞的凋亡率和坏死率分别为26.1%和27.7%，而正常培养细胞分别为0.08%和0%。谷氨？酸诱导细胞凋亡时，p-DAPK表达下降。荧光显微镜观察可见DCTP定位于细胞质。用40mmol/L谷氨酸分别诱导转染pcDNA3.1？（-）-DCTP和pcDNA3.1（-）质粒（对照质粒）的SH-SY5Y细胞，流式细胞仪检测结果显示，前者凋亡率为43.7%，而后者凋亡率为？62.2%。Westernblotting检测结果显示，在谷氨酸诱导下，与转染pIRES2-EGFP质粒（对照质粒）的SH-SY5Y细胞相比，转染？pIRES2-DCTP-EGFP质粒的细胞内DAPK和p-DAPK水平均无明显变化。结论？？DCTP基因的表达产物定位于SH-SY5Y胞质。？DCTP可以抵抗谷氨酸诱导的SH-SY5Y细胞的凋亡，但并不影响DAPK的磷酸化及其表达水平。
%K 死亡相关蛋白激酶
%K 基因疗法
%K 谷氨酸
%K 细胞凋亡
%K DNA降解
%K 坏死
%U http://www.jfjyxzz.org.cn/Magazine/Show.aspx?ID=28852