%0 Journal Article
%T HBV表型耐药方法的建立及临床分离株的表型耐药分析
%A 刘禄
%A 郝瀚
%A 刘永明
%A 苏何玲
%A 蒋林彬
%A 纪冬
%A 刘文
%A 思兰兰
%A 徐东平
%A 钟彦伟
%J 解放军医学杂志
%P 632-634
%D 2010
%X 目的？建立HBV表型耐药分析方法，体外培养慢性乙型肝炎患者血清HBV分离株并系统分析其对拉米夫定（LAM）？的敏感性。方法？？从1例LAM耐药慢性乙型肝炎患者血清中提取HBVDNA，PCR扩增RT基因，克隆到pGEM-Teasy载体中，随？机挑选10个克隆进行DNA序列测定，并分析RT区LAM耐药相关的突变位点。用XhoI和NcoI双酶切pGEM-Teasy-RT及？pTriEx-HBV（C），构建1.1倍HBV野生株和LAM耐药突变株的重组载体pTriEx-wRT和pTriEx-mRT，转染人肝癌细胞系HepG2？细胞。转染60h后加入不同浓度（0、0.01、0.1、1、10、100μmol/L）的LAM，药物连续作用5d后，抽提病毒核心颗粒HBVDNA，通过实时荧光PCR及Southernblotting检测不同药物浓度作用下HBVDNA的复制水平。结果？？成功建立体外HBV表型耐药分析方法。？野生未突变株重组载体pTriEx-wRT转染HepG2细胞后，随着LAM浓度的升高，HBVDNA水平明显下降，而突变株重组载体？pTriEx-mRT转染HepG2细胞后，HBVDNA水平无明显下降，IC？50？值与野生株相比增加了2500倍。结论？？建立的HBV表型耐药分析方法对监测HBV耐药性具有可行性。？？
%K 肝炎
%K 乙型
%K 慢性
%K 拉米夫定
%K 药物耐受性
%K 突变
%U http://www.jfjyxzz.org.cn/Magazine/Show.aspx?ID=22015