%0 Journal Article
%T 人源DCF1基因原核表达载体构建及蛋白分离纯化
%A 王倩
%A 杨眉
%A 冯瑞丽
%A 王娇
%A 文铁桥
%J 生物技术通报
%P 195-200
%D 2014
%R 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2014.12.033
%X 为了深入研究DCF1(DendriticCellFactor1)基因的作用，以质粒pcDNA3.1-DCF1-TAT为模板体外扩增得到片段DCF1-TAT，将测序正确的目的片段克隆入原核表达载体pET32a，转化大肠杆菌Rosetta(DE3)，异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达，并优化表达条件。以尿素溶解包涵体蛋白，并优化溶解条件，通过Ni离子亲和层析柱进行纯化，再透析复性目的蛋白。用SDS-PAGE检测目的蛋白的表达和纯化结果，并用Westernblot进行验证。结果表明，重组表达载体pET32a-DCF1-TAT构建成功，并在大肠杆菌Rosetta中成功表达。融合蛋白主要以包涵体形式存在，经过尿素溶解，Ni离子亲和层析柱纯化获得高纯度的目的蛋白。SDS-PAGE和Westernblot检测结果显示蛋白分子量大小与预期结果相符。
%K 人源
%K DCF1
%K 基因
%K PTD
%K TAT
%U http://biotech.caas.cn/CN/abstract/abstract10500.shtml