%0 Journal Article
%T 多功能M13KE噬菌体展示系统的建立
%A 方月琴
%A 郭娟宁
%A 陆豪杰
%A 朱国强
%J 生物技术通报
%P 143-147
%D 2014
%X 以M13KE噬菌体为起始载体，建立一种无需辅助噬菌体的较长片段多肽库展示系统，以解决当前噬菌体展示仅能筛选短肽库现象，并扩大靶向高通量筛选范畴。根据M13KE次要外壳蛋白（Minorcoatproteinofwild-typeM13KE，wt-pIII）基因III（wt-geneIII）结构与功能关系，设计并扩增出能发挥其基因功能的截短基因III（TruncatedgeneIII，tgIII）；通过拼接-重叠-延伸PCR（Splice-overlapping-extensionpolymerasechainreaction，SOEing-PCR）获得含启动子、信号肽和结构基因的融合基因片段，将其插入至M13KE载体的合适部位，进行蛋白质诱导表达，SDS-PAGE和Westernblot分析。同时在wt-gIII和tgIII部位分别插入HA和c-Myc多肽标签，再次进行表达和检测。结果显示，tgIII被插入到M13KE的非必需部位，利用抗蛋白III（anti-M13pIII）抗体进行Westernblot检测发现，wt-gIII和tgIII均能表达pIII（proteinIII，pIII）；anti-HA和c-Myc抗体都能检测到2个标签蛋白和pIII蛋白质的表达。获得一种多功能M13KE载体，具有既能表达短片段多肽库，也能表达较长片段多肽库的潜能，而且无需辅助噬菌体，可用于更大范围的高通量靶向筛选。
%K 靶向高通量筛选
%K 噬菌体展示系统
%K M13KE
%K 长片段多肽库
%U http://biotech.caas.cn/CN/abstract/abstract10154.shtml