%0 Journal Article
%T 斑点叉尾鮰（Ictaluruspunctatus）LEAP2成熟肽在大肠杆菌中的融合表达
%A 高北
%A 陶妍
%J 生物技术通报
%P 130-135
%D 2014
%X 以斑点叉尾鮰（Ictaluruspunctatus）肝脏为基因克隆的材料，通过RT-PCR对编码LEAP2成熟肽区域41个氨基酸的cDNA片段（mLEAP2）进行克隆。根据斑点叉尾鮰与其他鱼类、哺乳动物及两栖动物等其他物种LEAP2成熟肽区域氨基酸序列的比对结果，发现存在14个保守的氨基酸残基，其中4个高度保守的半胱氨酸残基位于成熟肽的羧基端区域，在空间上可形成两对二硫键，推测与LEAP2的抗菌活性有关。进一步构建重组表达质粒pET32a-mLEAP2，使mLEAP2基因与携带有6×His-tag标签和肠激酶识别位点的硫氧还蛋白trxA基因融合，转化至大肠杆菌BL21（DE3）后，在25℃下，经0.7mmol/LIPTG诱导培养16h后，成功表达了trxA-mLEAP2融合蛋白。Tricine-SDS-PAGE显示，细胞经超声破碎后，上清和沉淀中均含融合蛋白，采用固化金属离子亲和层析（IMAC）对其进行纯化，得到了纯化的融合蛋白。
%K 斑点叉尾鮰
%K LEAP2成熟肽
%K RT-PCR
%K 融合表达
%U http://biotech.caas.cn/CN/abstract/abstract10152.shtml