%0 Journal Article
%T 无乳链球菌诱导吉富罗非鱼分泌型免疫球蛋白M（sIgM）重链基因的克隆及原核表达
%A 王培
%A 鲁义善
%A 王蓓
%A 汤菊芬
%A 蔡佳
%A 吴灶和
%A 简纪常
%J 生物技术通报
%P 116-123
%D 2014
%X 以灭活的无乳链球菌（Streptococcusagalactiae）诱导后的吉富罗非鱼（Oreochromisniloticus）为材料，构建其头肾SMARTcDNA文库，应用同源性克隆和RACE-PCR技术克隆到吉富罗非鱼（O.niloticus）分泌型免疫球蛋白M（sIgM）重链基因的全长cDNA序列并对其进行生物信息学分析。sIgM基因cDNA全长为1921bp，开放阅读框（ORF）为1740bp，5'端非编码区#br#（5'-UTR）41bp，3'端非编码区（3'-UTR）140bp，编码579个氨基酸，N端有信号肽结构。预测分子量（MW）为64.26kD，理论等电点（pI）为5.36。系统进化树分析显示，吉富罗非鱼（O.niloticus）sIgM与牙鲆（Paralichthysolivaceus）和军曹鱼（Rachycentroncanadum）的亲缘关系较近。sIgM基因有4个恒定区。将吉富罗非鱼（O.niloticus）sIgM基因恒定区序列克隆到原核表达载体pET-28a（+）中，构建原核表达质粒pET28-sIgM，诱导表达后确定最优条件为37℃条件下，IPTG浓度为0.05mmol/L时诱导4h蛋白表达量最大。纯化蛋白后经Westernblot分析，sIgM融合蛋白与鼠抗His-Tag发生特异结合，表明目的蛋白成功表达。
%K 吉富罗非鱼
%K 免疫球蛋白M
%K 基因克隆
%K 原核表达
%K 蛋白免疫印迹
%U http://biotech.caas.cn/CN/abstract/abstract10150.shtml