%0 Journal Article
%T 烟台黑猪SLA-I重链基因末端生物素修饰及表达
%A 刘筏
%A 杨金刚
%A 翟晓鑫
%A 董宋鹏
%A 高凤山
%J 生物技术通报
%P 191-195
%D 2014
%X 为构建烟台黑猪SLA-2重链基因偶合生物素化酶BirA底物肽(BirAsubstratepeptide，BSP)并研究其在pET-28a#br#(+)中的表达，设计烟台黑猪SLA-2-BSP复合基因引物，PCR扩增烟台黑猪SLA-2-YTH-BSP复合基因，并克隆至pMD19-TSimple#br#Vectorp，经酶切鉴定后将SLA-2-YTH-BSP复合基因与表达系统pET-28a(+)链接，并转化到BL21(Rosseta)菌进行诱导表达，#br#SDS-PAGE检测目的蛋白。表达蛋白经过Ni-NTA亲和纯化，并经SDS-PAGE检测蛋白纯化效果。PCR结果显示SLA-2-BSP大小为#br#900bp，并成功克隆到pMD19-TSimpleVector，酶切鉴定大小为876bp，该基因链接到pET-28a(+)并转化到BL21(Rosseta)菌，#br#经诱导表达和SDS-PAGE检测目的蛋白的大小为32.4kD。目的蛋白以包涵体形式存在，纯化后蛋白纯度达到90%以上。成功构建#br#烟台黑猪SLA-I重链偶合生物素化酶BirA底物肽(BSP)的pET-28a(+)的重组表达系，为下一步的SLA-I类分子四聚体研究鉴#br#定基础。
%K 烟台黑猪SLA-2
%K 重链基因
%K 生物素化酶BirA
%K 底物肽
%K 纯化
%U http://biotech.caas.cn/CN/abstract/abstract10128.shtml