%0 Journal Article
%T 建立CRISPR/Cas9慢病毒系统高效敲除人源AIP1基因
%A 苏甲林
%A 阙彪
%A 张继勤
%A 李锦辉
%A 王敏
%A 纪卫东
%J 生物技术通报
%P 219-224
%D 2015
%R 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.08.032
%X 旨在构建AIP1基因CRISPR/Cas9敲除体系,获得高效、稳定、永久性AIP1敲除的人胚肾细胞株（293T）。针对AIP1的外显子设计3个20bp的sgRNA（sp1、sp2和sp3）。与PX458载体连接,构建PX458-sgRNA敲除表达载体。T7E1实验评估敲除效率。将敲除效率最高的sgRNA与lentiCRISPRv2慢病毒载体连接,构建lentiCRISPRv2-sgRNA敲除表达载体,将阳性重组质粒导入病毒包装细胞293T中,收集病毒上清液转染293T细胞。对敲除成功的293T细胞通过有限稀释法构建敲除AIP1基因的稳定细胞株。Westernblot测定转染后293T细胞中AIP1蛋白的表达量。结果显示,测序证实AIP1的3个靶序列分别正确插入PX458表达载体中,T7E1实验证实AIP1sgRNAsp2靶向敲除效率最高;成功构建lentiCRISPRv2-sgRNAsp2AIP1敲除表达载体,并包装病毒,感染293T细胞;Westernblot证实获得稳定的AIP1基因表达缺失的293T细胞株。建立了能稳定敲除AIP1基因的CRISPR/Cas9慢病毒系统,成功获得AIP1敲除的293T稳定细胞株。
%K CRISPR/Cas9
%K 慢病毒
%K AIP1
%K 稳定细胞株
%U http://biotech.caas.cn/CN/abstract/abstract10788.shtml