%0 Journal Article
%T 柔嫩艾美耳球虫保守蛋白CHP559基因克隆与真核表达
%A 翟颀
%A 黄兵
%A 董辉
%A 赵其平
%A 朱顺海
%A 梁思婷
%A 李莎
%A 杨斯涵
%A 韩红玉
%J 生物技术通报
%P 161-168
%D 2015
%R 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.07.024
%X 为构建柔嫩艾美耳球虫保守蛋白EtCHP559基因的真核表达重组质粒pcDNA3.1-flag-EtCHP559，并转染DF-1细胞进行表达。利用5'RACE技术克隆获得了柔嫩艾美耳球虫EtCHP559基因全长cDNA序列，该基因全长为1746bp，ORF为104-1327bp，编码407个氨基酸，编码蛋白的分子量约为46kD，并利用生物信息学分析该基因编码蛋白的性质、结构等特征，发现该蛋白含有跨膜结构和信号肽。通过RT-PCR扩增得到含完整开放阅读框的基因片段，并将其与真核表达载体pcDNA3.1-flag连接，构建了真核重组表达质粒pcDNA3.1-flag-EtCHP559，所构建的真核重组表达质粒pcDNA3.1-flag-EtCHP559经过PCR和双酶切鉴定，可见一条大小约为1224bp的目的条带；重组质粒转染DF-1细胞后，免疫印迹检测可见大小约为47kD的目的蛋白条带，间接免疫荧光实验显示在DF-1细胞中检测到绿色荧光。这些研究结果表明已成功获得了EtCHP559的全长序列，并成功构建了EtCHP559的真核重组表达质粒，在真核细胞DF-1中获得表达，为深入研究EtCHP559的功能奠定了基础。
%K 柔嫩艾美耳球虫
%K CHP559基因
%K DF-1细胞
%K 真核表达
%U http://biotech.caas.cn/CN/abstract/abstract10744.shtml