%0 Journal Article
%T LSPA1早期基因gp22细菌双杂交诱饵载体与筛选文库的建立
%A 冯梦蝶
%A 毛普加
%A 洪愉
%A 许泽仰
%A 赵继华
%A 杨洪文
%A 宋武战
%A 黄芬
%A 井申荣
%A 曾韦锟
%J 生物技术通报
%P 214-219
%D 2015
%R 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.07.033
%X 构建细菌双杂交系统中的诱饵载体pKT25-gp22和甲型副伤寒沙门氏菌基因文库以便后续的筛选实验。PCR扩增获得gp22基因，插入pKT25构成诱饵质粒pKT25-gp22。提取甲型副伤寒沙门氏菌基因组DNA，经Sau3AⅠ部分酶切后连接到pUT18C质粒的BamHⅠ位点，获得基因组DNA表达文库。用化转的方法将诱饵质粒与pUT18C共转入BTH101，检测诱饵质粒自激活作用，并检测诱饵蛋白对宿主菌的毒性。将文库质粒电转至JM109感受态，PCR鉴定文库的多样性。诱饵载体pKT25-gp22无自激活报告基因的能力且对细菌的生长无毒性。所构建的副甲基因组文库覆盖基因组达8倍，满足文库筛选需要。成功构建细菌双杂交系统中诱饵载体pKT25-gp22，筛选文库质量良好，可应用于细菌双杂交实验。
%K 细菌双杂交
%K 诱饵载体
%K 基因组文库
%K 早期基因
%K 甲型副伤寒沙门氏菌
%U http://biotech.caas.cn/CN/abstract/abstract10752.shtml