%0 Journal Article
%T 视黄酸刺激RARE调控荧光素酶报告基因表达系统的构建与应用
%A 袁源
%A 陈亚琼
%J 生物技术通报
%P 209-215
%D 2015
%R 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.06.033
%X 类维生素A，通过视黄酸(retinoicacid，RA)代谢旺盛组织的靶基因调控，与生物节律通路相互作用，在代谢性疾病发展过程中发挥着重要作用。在293T及小鼠肝原代细胞中，构建视黄酸反应元件(RARE)调控的荧光素酶报告基因表达系统，为研究类维生素A与节律和代谢研究中靶基因上游调控信号分子提供可能。用定点突变PCR方法在pGL3-Basic载体中插入RARE片段，检测报告基因表达及RARE对视黄酸响应的半数有效浓度(EC50)，初步筛选可能调控RARE的靶基因，通过酶切连接将荧光素酶报告基因Luciferase和启动子RARE片段构入穿梭载体pShuttle，转入感受态细胞BJ518获得重组腺病毒载体Ad-Basic-RARE-Luc，转染MGH细胞并进行扩增，在小鼠肝原代细胞检测腺病毒活性。结果显示，构建的RARE调控的荧光素酶报告基因表达载体在293T细胞可被RA刺激，RARβ促进RA刺激RARE表达，而CRY1抑制RARE-Luc对RA的响应，并成功构建了在小鼠肝原代细胞响应RA刺激的Adeasy-Basic-RARE-Luc腺病毒载体。
%K 视黄酸
%K RARE
%K 荧光素酶报告基因
%K 节律
%K 代谢
%U http://biotech.caas.cn/CN/abstract/abstract10718.shtml