%0 Journal Article
%T 人类3-磷酸甘油醛脱氢酶的原核表达、纯化和鉴定
%A 李毅
%A 万涛
%A 杨琴
%A 蔡雪飞
%A 张文露
%A 汤华
%J 生物技术通报
%P 102-105
%D 2009
%X 为了研究3-磷酸甘油醛脱氧酶(GAPDH)化生物学功能,以pcDNA3.1-GAPDH质粒为模板,PCR方法扩增GAPDH基因,经BamHI和SalI双酶切后插入相同酶切的pET32a(+)载体,构建His-GAPDH融合蛋白表达质粒pET32a(+)-GAPDH;转化JM109感受态细胞,并进行阳性克隆筛选,扩增目的质粒;转化大肠杆菌BL21菌株,经IPTG诱导产生融合蛋白,亲和层析柱纯化后,用SDS-PAGE和Westernblotting检测GAPDH蛋白表达情况。结果表明,构建的人GAPDH基因表达载体经序列测定证实,与GenBank数据完全一致;双酶切鉴定证实,克隆基因正确插入pET32a(+)载体;表达质粒pET32a(+)-GAPDH在大肠杆菌BL21中成功地诱导表达了可溶性His-GAPDH融合蛋白,纯化后SDS-PAGE和Westernblotting检测证实融合蛋白表达成功。人GAPDH原核表达载体的成功构建,及6His-GAPDH融合蛋白的正确表达,为进一步深入研究GAPDH的生物学功能奠定了基础。
%K 三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)
%K 原核表达
%K SDS-PAGE
%K 免疫印迹
%U http://biotech.caas.cn/CN/abstract/abstract4799.shtml