%0 Journal Article
%T HIV-1Gag多表位嵌合基因的构建及表达蛋白的抗体制备
%A 柳发勇
%A 韩莉
%A 刘朝奇
%A 覃晓琳
%A 杨凡
%A 余枫华
%J 生物技术通报
%P 146-149
%D 2010
%X 旨在通过构建Gag的抗原多表位融合基因及在原核系统的高表达,为HIV诊断及可能的疫苗制备提供试验基础。选定HIV-1Gag基因中3个片段包含较多抗原表位的区域,设计带有酶切位点的引物,用PCR的方法从HIV-1HXB2全基因扩增编码这3个片段的基因序列,通过质粒提取、酶切、测序方法鉴定基因片段的正确性,SDS-PAGE和Westernblotting测定融合蛋白的表达,并免疫动物制备相应抗体。结果显示,构建的HIV-1Gag多表位嵌合基因的原核表达质粒,酶切和测序结果表明基因序列正确,基因全长576bp。在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达的重组蛋白分子量为27kD,以包涵体的形式存在。纯化目的蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体IgG。ELISA和免疫荧光方法检测显示制备的多克隆抗体能具有特异性反应。成功构建和高表达了HIV-1Gag多表位融合蛋白,纯化蛋白制备的抗体与HIV-1Gag有特异性结合。为进一步研究HIV-1奠定了试验基础。
%K HIV-1Gag嵌合基因
%K 蛋白表达
%K 抗体
%K 免疫原性
%U http://biotech.caas.cn/CN/abstract/abstract5446.shtml