%0 Journal Article
%T 甘菊DFL::EGFP高效融合蛋白表达载体的构建
%A 王翊
%A 付建新
%A 戴思兰
%J 生物技术通报
%P 102-108
%D 2010
%X 增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescentprotein,EGFP)是一种优化的突变型GFP,DFL是从甘菊中分离出的LFY基因的同源序列。为了研究DFL基因的功能和表达模式,研究利用小片段克隆法将linker序列插入到EGFP基因5′端启始密码子前面,在pBI121载体的CaMV35S启动子的3′端后面插入一段多克隆位点,成功地构建了pBI-DFL-EGFP表达载体。通过设计特异引物,利用PCR技术扩增得了到拟南芥LFY基因的启动子序列,用粘性末端PCR技术将pBI-DFL-EGFP表达载体中CaMV35S启动子替换成LFY基因启动子,构建成了pLFY-DFL-EGFP表达载体。用含有pBI-DFL-EGFP和pLFY-DFL-EGFP质粒的农杆菌侵染洋葱表皮细胞,在荧光显微镜下分别用蓝光激发,均观测到了荧光。这一结果表明,融合蛋白DFL∷EGFP表达载体构建成功,同时还证明了通过PCR技术克隆到的LFY启动子序列具有启动子功能。
%K 小片段克隆
%K 粘性末端PCR
%K 表达载体构建
%K LFY启动子
%K DFL∷EGFP融合蛋白
%U http://biotech.caas.cn/CN/abstract/abstract5357.shtml