%0 Journal Article
%T 重叠PCR法构建副猪嗜血杆菌外源打靶基因
%A 张念章
%A 储岳峰
%A 赵萍
%A 高鹏程
%A 贺英
%A 逯忠新
%J 生物技术通报
%P 186-190
%D 2011
%X 利用重叠PCR法构建了包含副猪嗜血杆菌血清5型hhdA基因上、下游同源臂(H-up、H-down)和卡那霉素抗性基因(Kan)的外源打靶基因Hup-kan-Hdown。通过对反应条件进行优化,发现退火温度为50.5℃,加入H-up、H-down和Kan各为5μL(450ng)时得到Hup-kan-Hdown的量最多。将此外源打靶基因的两端引入PstI和SacI酶切位点,克隆至具有迁移作用的自杀质粒pDS132,构建了可在大肠杆菌E.coliSM10-λpir中稳定遗传的打靶载体,为下一步建立副猪嗜血杆菌的高效基因打靶系统奠定基础。
%K 副猪嗜血杆菌
%K 重叠PCR
%K 外源打靶基因
%U http://biotech.caas.cn/CN/abstract/abstract6122.shtml