%0 Journal Article
%T 太平洋牡蛎i型溶菌酶基因的克隆与重组高效表达
%A 谢三群
%A 丛丽娜
%A 张欢
%A 王丹
%J 生物技术通报
%P 127-132
%D 2011
%X 在双壳类软体动物牡蛎体内,溶菌酶(Lysozyme)在实现宿主免疫防御,破坏和消除侵入体内的病原中发挥着重要的作用。根据GenBank已有的太平洋牡蛎溶菌酶的全长cDNA序列(GenBank:AB179775),通过RT-PCR技术,从太平洋牡蛎(Crassostreagigas)中克隆得到溶菌酶(简称为CgLys)基因的开放阅读框(openreadingframe,ORF)序列。生物信息软件分析表明,其ORF为414bp,编码137个氨基酸(aa),前20个aa为信号肽,成熟肽由117个aa组成,其分子量为13.2kD。通过构建分子系统发育树对其同源性进行分析比较,初步推断该CgLys属于i型溶菌酶。将该CgLys基因的成熟肽亚克隆进原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组质粒pET32a(+)-CgLys,再转化至大肠杆菌BL21(DE3)pLysS。该基因工程菌经IPTG诱导发酵后,成功高效地表达了重组CgLys蛋白,其分子质量约为18kD。该重组CgLys蛋白主要存在于细菌裂解液的上清液中,即以可溶性蛋白形式存在。上述结果将显着简化后续的蛋白纯化过程,为今后扩大规模生产牡蛎溶菌酶提供参考。
%K 无脊椎动物
%K 太平洋牡蛎
%K i型溶菌酶
%K 重组表达
%K 纯化
%U http://biotech.caas.cn/CN/abstract/abstract6090.shtml