%0 Journal Article
%T 丙型肝炎病毒重要编码蛋白重组腺病毒载体的构建
%A 刘娇
%A 周帆
%A 陈庆美
%A 单晓亮
%A 唐霓
%J 生物技术通报
%P 146-149
%D 2011
%X 旨在构建含HCVcore、E1、E2、F、NS3、NS5a和NS5b基因的重组腺病毒载体。运用PCR技术扩增目的基因片段,通过酶切连接方法将上述7种基因片段克隆至穿梭质粒pAdTrack-TO4中,然后将重组质粒用PmeⅠ线性化后与骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183细菌中同源重组。用PacⅠ酶把重组腺病毒载体线性化后转染HEK293细胞后产生重组腺病毒颗粒。利用穿梭质粒中带有绿色荧光蛋白GFP对其感染效率进行监测。结果显示,酶切鉴定和测序结果均证实含core、E1、E2、F、NS3、NS5a和NS5b基因的重组腺病毒构建成功,在感染的Huh7细胞中观察到绿色荧光蛋白GFP。成功制备了高滴度的腺病毒Ad-core、Ad-E1、Ad-E2、Ad-F、Ad-NS3、Ad-NS5a和Ad-NS5b,为后续研究奠定了基础。
%K HCV编码蛋白
%K 穿梭质粒
%K 骨架质粒
%K 同源重组
%K 腺病毒
%U http://biotech.caas.cn/CN/abstract/abstract5990.shtml