%0 Journal Article
%T 构建LEF1基因毛囊特异表达载体并稳定转染胎儿成纤维细胞
%A 李彬
%A 鲍文蕾
%A 张涛
%A 侯鑫
%A 郭旭东
%A 王潇
%A 王志钢
%A 刘东军
%J 生物技术通报
%P 141-145
%D 2011
%X 旨在构建内蒙古白绒山羊(Caprahircus)淋巴样增强因子-1(Lymphoidenhancerfactor,LEF1)基因真核表达载体并转染胎儿成纤维细胞,获得稳定表达红色荧光蛋白及毛囊特异性表达LEF1的转基因细胞克隆。以pCDsRed2载体为基本骨架将LEF1基因亚克隆到KAP6-1启动子下游,连接红色荧光蛋白表达元件,构建LEF1基因毛囊特异表达载体pCDsRed-KL。外源表达载体以lipofectamineTM2000介导转染胎儿成纤维细胞,通过G418筛选获得稳定转染的细胞克隆。PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合。测序显示构建的表达载体pCDsRed-KL序列中,LEF1基因正确连接在KAP6-1启动子下游,顺序连接CMV启动子和红色荧光蛋白基因,载体构建正确。脂质体介导的稳定转染效率约为14.0%,经G418筛选得到高效表达红色荧光蛋白转基因细胞克隆。PCR检测显示外源KAP6-1启动子和LEF1基因整合到胎儿成纤维细胞基因组中。
%K 内蒙古白绒山羊
%K 淋巴样增强因子-1
%K 毛囊特异性表达载体
%K 稳定转染
%U http://biotech.caas.cn/CN/abstract/abstract5999.shtml