%0 Journal Article
%T 拟南芥中柯浩体蛋白Atcoilin的克隆、表达及纯化
%A 张静
%A 田兆丰
%A 朱文壮
%A 张飞云
%J 生物技术通报
%P 63-68
%D 2012
%X 旨在制备柯浩体的标志蛋白——Atcoilin蛋白,利用pET-28a与目的基因构建重组表达质粒,经DNA测序证实插入序列与设计完全一致后,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,产物用SDS-PAGE及Westernblotting分析鉴定。通过分别改变IPTG的浓度、培养时间、培养温度等来优化Atcoilin蛋白的表达条件。表达出的重组蛋白经过镍柱、分子筛进行纯化。结果显示,原核表达载体pET28a-At1g13030成功构建,可在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,得到相应的重组蛋白经Westernblotting鉴定正确。在IPTG浓度为0.7mmol/L,18℃培养20h的条件下,目的蛋白表达量最高。经过SDS-PAGE分析鉴定,过镍柱、分子筛后得到的重组蛋白纯度较高。
%K Atcoilin蛋白
%K 表达
%K 纯化
%K 标志蛋白
%U http://biotech.caas.cn/CN/abstract/abstract6388.shtml