%0 Journal Article
%T 葡萄ISSR-PCR反应体系的建立与优化
%A 赖呈纯
%A 范丽华
%A 谢鸿根
%A 余亚白
%A 郑铭西
%A 谢福鑫
%J 生物技术通报
%P 159-164
%D 2012
%X 采用正交设计L9(34)对影响葡萄ISSR-PCR反应体系的4个因素(dNTP、TaqDNA聚合酶、引物、模板DNA)在3个浓度水平上进行试验,并通过直观分析初步确定其反应体系;在此基础上,通过单因素试验探讨了dNTP、TaqDNA聚合酶、引物、模板DNA、退火温度及循环次数等因素或条件对葡萄ISSR-PCR扩增结果的影响,确定最佳反应水平。最终建立了葡萄ISSR-PCR扩增的最佳反应体系:在25μL的反应体系中,dNTP浓度0.2mmol/L,TaqDNA聚合酶的用量0.5U,引物浓度0.4mmol/L,DNA模板用量40ng。反应程序:94℃预变性5min;94℃变性1min,52℃退火1min,72℃延伸1min30s,40次循环;最后72℃延伸10min,10℃保存。
%K 葡萄ISSR-PCR
%K 正交设计
%K 单因素试验
%K 反应体系
%U http://biotech.caas.cn/CN/abstract/abstract6340.shtml