%0 Journal Article %T 正交设计优化广西火桐ISSR-PCR反应体系 %A 代文娟 %A 骆文华 %A 马虎生 %A 符支宏 %A 唐文秀 %A 赵博 %A 盘波 %A 黄仕训 %J 生物技术通报 %P 78-82 %D 2013 %X 以广西火桐DNA为模板,利用正交试验分别对ISSR-PCR反应的MgCl2浓度、dNTPs浓度、TaqDNA聚合酶浓度、模板DNA浓度进行了优化,并通过梯度PCR确定最佳退火温度和循环次数,最终确定广西火桐最佳反应体系及扩增条件。25μL体系中1×PCRbuffer,2.5mmol/LMgCl2,0.15mmol/LdNTPs,0.06U/μLTaqDNA聚合酶,3ng/μLDNA模板,0.2μmol/L引物;最佳扩增程序为:94℃预变性5min;94℃变性45s,52℃退火45s,72℃延伸1.5min,共30个循环;72℃最后延伸7min。扩增后的PCR产物在4℃保存。应用该ISSR体系对10个广西火桐样品进行了扩增,证实了该体系的适用性和稳定性。 %K 广西火桐 %K 正交设计 %K 优化 %U http://biotech.caas.cn/CN/abstract/abstract9954.shtml