%0 Journal Article
%T PDGF-GAL真核表达载体的构建及细胞表达
%A 荣曼
%A 张锐虎
%A 刘田福
%J 生物技术通报
%P 124-129
%D 2013
%X 旨在构建真核表达载体pcDNA-PDGF-GAL，观察重组质粒转染N-2a细胞后甘丙肽基因（galanin，GAL）的表达水平。采用PCR方法，以重组质粒pUC18-PDGF-GAL为模板，扩增PDGF-GAL基因序列，最终定向克隆入载体pcDNA3.1并替换该载体的CMV启动子与增强子序列，从而构建具有神经细胞特异性的表达载体pcDNA-PDGF-GAL。然后利用脂质体法将重组质粒瞬时转染小鼠N-2a细胞，分别在转染后24、48和72h收集细胞及细胞培养物，采用RT-PCR和ELISA方法，鉴定GAL基因在神经细胞中的过表达。结果显示，经PCR和DNA序列测定证实，目的基因已插入表达载体，RT-PCR和ELISA证明，脂质体法瞬时转染N-2a细胞实现GAL基因的过表达。成功构建pcDNA3.1-PDGF-GAL，实现GAL基因在N-2a细胞过表达，从而为制作过表达GAL的稳转细胞及进一步研究GAL在神经系统的生物学功能奠定基础。
%K GAL
%K 表达载体
%K N-2a
%K 细胞
%K 转染
%U http://biotech.caas.cn/CN/abstract/abstract9735.shtml