%0 Journal Article
%T 山羊Klf4基因克隆、原核表达和His-Klf4融合蛋白纯化
%A 辛桂瑜
%A 王丽霞
%A 叶新慧
%A 申魁魁
%A 符欣蕙
%A 李恭贺
%A 张明
%A 卢晟盛
%A 卢克焕
%A 郑喜邦
%J 生物技术通报
%P 80-85
%D 2013
%X 旨在克隆山羊Klf4基因，构建重组质粒pET30a-Klf4，通过原核表达技术获得纯化的His-Klf4融合蛋白。从山羊的生殖脊中提取总RNA，用RT-PCR的方法扩增Klf4基因编码区序列，通过TA克隆构建pMD18-T-Klf4重组质粒。酶切鉴定与测序分析后将Klf4的cDNA亚克隆至pET-30a载体，构建重组质粒pET30a-Klf4。酶切鉴定后将其导入大肠杆菌BL21中，用IPTG诱导表达，SDS-PAGE和Westernblotting检测确认，镍离子金属螯合亲和层析法纯化His-Klf4融合蛋白。结果表明：（1）从山羊生殖脊中克隆了Klf4基因，其开放阅读框由1434个核苷酸组成，编码478个氨基酸，而且该序列与绵羊的同源性最高，达到98.5％；（2）经过SignalP4.0在线分析，Klf4的编码蛋白不存在信号肽；（3）经SDS-PAGE和Westernblotting分析表明，重组质粒pET30a-Klf4在大肠杆菌中得以表达；在变性条件下纯化，获得了His-Klf4融合蛋白。
%K Klf4
%K 分子克隆
%K 原核表达
%K 蛋白纯化
%K 山羊
%U http://biotech.caas.cn/CN/abstract/abstract9723.shtml