%0 Journal Article
%T EB病毒融合蛋白Zta-P54在大肠杆菌中的表达、纯化及鉴定
%A 王云龙
%A 张春艳
%A 李玉林
%A 程蕾
%A 王继创
%A 邓黎黎
%A 米海
%A 白晓静
%J 生物技术通报
%P 173-178
%D 2014
%X 为获得能用于检测试剂盒的高纯度具有活性的EB病毒融合蛋白,以pGEX5T-BZLF1-BMRF1质粒为模板进行PCR扩增得到BZLF1-BMRF1融合基因,将其插入pET32a中,构建表达质粒pET32a/BZLF1-BMRF1。将该质粒转入大肠杆菌培养,经IPTG诱导获得Zta-P54融合蛋白。用DEAE-SepharoseCL-6B和Ni-NTA亲和层析纯化,并通过SDS-PAGE和Westernblot对Zta-P54融合蛋白进行鉴定。双酶切鉴定和测序结果显示成功构建pET32a/BZLF1-BMRF1质粒,SDS-PAGE显示该蛋白相对分子量约为60kD,与预期结果一致。纯化后获得纯度为96.5%的Zta-P54融合蛋白。Westernblot检测该蛋白有良好的生物活性和反应特异性。因此,成功构建pET32a/BZLF1-BMRF1质粒,在大肠杆菌中可溶性表达。最终获得纯度高、生物活性好的融合蛋白。
%K EB病毒
%K Zta-P54融合蛋白
%K 原核表达
%K 蛋白纯化
%U http://biotech.caas.cn/CN/abstract/abstract10326.shtml