%0 Journal Article
%T 细菌脂肪酶在大肠杆菌细胞表面的功能性展示
%A 徐丽香
%A 王作镇
%A 舒正玉
%A 武海龙
%A 刘艳如
%A 李欣
%A 黄建忠
%J 生物技术通报
%P 192-198
%D 2014
%X 细胞表面展示技术已广泛应用于突变文库的高通量筛选，有力地促进了蛋白质工程的发展。以来自于铜绿假单胞菌的自转运蛋白EstA的羧基端结构域作为锚定区，构建脂肪酶LipA与EstA羧基端结构域的融合基因，并将融合基因插入到改造后的pACYC-Duet表达载体中，获得表面展示载体pBCCB-X1。将载体pBCCB-X1分别导入到大肠杆菌JK321和大肠杆菌UT5600菌株中，以IPTG诱导融合基因的表达。分别用三丁酸甘油酯定性检测和pNPO定量检测诱导表达后的全细胞脂肪酶的水解活性。试验结果表明，脂肪酶LipA在大肠杆菌JK321和大肠杆菌UT5600细胞表面均得到功能性展示，水解活性分别为（2.8±0.1）U/OD和（2.6±0.06）U/OD。脂肪酶LipA在大肠杆菌细胞表面的功能性展示，为后续高通量筛选LipA突变基因文库，奠定了坚实的基础。
%K 大肠杆菌
%K 细胞表面展示
%K 脂肪酶A
%K 枯草芽胞杆菌
%U http://biotech.caas.cn/CN/abstract/abstract10291.shtml